標本采集的基本要求
人和動物細胞的標本采集的選擇與處理是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進行細胞培養(yǎng)的*步，若選擇與處理不當(dāng)，將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)，現(xiàn)將基本要求和注意事項敘述如下：
一、標本采集的基本要求
(一)標本的采集
1．新鮮標本組織易于培養(yǎng)成功，取材時應(yīng)在4～6h內(nèi)盡快能制作成細胞，盡快培養(yǎng)，若不能即時培養(yǎng)，應(yīng)將標本組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，于4℃存放。若標本組織塊較大，應(yīng)在清除表面血塊、壞死組織、脂肪和結(jié)締組織后，將其切成1cm3以下的小塊于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放，但時間不能超過24h。
2．若對所取標本材料懷疑有污染，應(yīng)將所取標本組織在含高濃度青、(400～800U／ml)甚至加入適量的的培養(yǎng)液于4℃下存放2h以上，再用PBS洗2～3次，以確保所取標本材料無菌。
3．所取標本材料應(yīng)避免紫外線的照射；避免接觸有毒有害的化學(xué)物質(zhì)，如碘、汞等。
4．標本取材應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等，一般來講，胚胎組織較成熟個體組織容易培養(yǎng)，分化低的較分化高的組織容易生長，腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。
5.原代細胞取材時要同時留好組織學(xué)標本和電鏡標本。對組織的來源、部位、包括供體的一般情況要做詳細的記錄，以備以后查詢。
(二)材料與器材
需要取材的各類組織；平衡鹽溶液；手術(shù)刀、眼科剪、鑷子、止血鉗、；平皿、小燒杯、三角燒瓶、無菌的大頭針、75％酒精棉球；消毒過的木板、蛋架等。
二、各類組織標本的取材技術(shù)
(一)皮膚和黏膜標本的取材
1.皮膚和黏膜是上皮細胞培養(yǎng)的重要組織來源，主要取白于手術(shù)過程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作，但面積一般2～3cm3即可，局部不留瘢痕，但取材時不要用碘酒消毒。
2．若培養(yǎng)上皮細胞，取材時不要切取太厚，盡可能去除所攜帶的皮下或黏膜下組織；若培養(yǎng)成纖維細胞，則反之。
3．皮膚黏膜因表面細菌、真菌很多，標本取材時應(yīng)嚴格消毒，必要時要用高濃度抗菌素和適量漂洗、浸泡。
(二)內(nèi)臟和實體瘤標本的取材
1．內(nèi)臟標本除消化道外基本是無菌的；實體瘤標本若沒有壞死或潰破基本也是無菌的。
2．內(nèi)臟和實體瘤標本取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位。
3．實體瘤標本取材時要取腫瘤細胞豐富的區(qū)域，要避開破潰、壞死液化部分，以防污染。
4．由于成纖維細胞的生長給以后的培養(yǎng)工作增加困難，因此要除去不需要的部分如血管、神經(jīng)，尤其結(jié)締組織。
(三)血液細胞標本的取材
1．一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細胞，操作嚴格無菌，盡量新鮮使用。
2．血液細胞標本取材時應(yīng)注意抗凝，通常采用肝素抗凝，常用肝素濃度為8～10U／ml血，肝素濃度過大導(dǎo)致溶血。若從血站取來的獻血員的血液，因常用含枸櫞酸鹽抗凝，對此類血標本不能用含鈣、鎂離子的洗液來處理細胞以免加速血液中促進血液凝固而影響收獲血細胞及淋巴細胞。
(四)骨髓、羊水、胸／腹水細胞標本的取材
嚴格無菌操作，注意抗凝，盡快分離培養(yǎng)。離心后，用無鈣、鎂離子PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。
(五)動物組織取材
1．鼠胚組織取材
(1)引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物，將其整個浸泡在含有75％酒精的燒杯中2～3s(時間不能太長，以避免酒精從口或其他通道進入體內(nèi)，影響組織活力)。
(2)從含有75％酒精的燒杯中取出動物，在消毒木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢，用無菌止血鉗挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開皮膚，用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾，把動物反包，暴露軀干，然后再固定。
(3)更換無菌解剖器材，采用無菌操作法解剖取出胚胎，置于無菌平皿中。
2．幼鼠胚腎(或肺)取材幼鼠采用上述方法處死消毒后：
(1)腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè)，然后采用無菌法打開胸腔取肺。
(2)或背部朝上固定在木板上，先將背部毛皮切開、游離并拉向兩側(cè)，然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。
(六)雞(鴨)鳥類胚胎組織取材
1．取孵化至適當(dāng)胚齡(9～12d)的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋，說明胚體發(fā)育良好，并用有色筆畫出氣室和胚體位置。
2．將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，用75％酒精棉球擦干，再經(jīng)碘酒、75％酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或中號鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼，再用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚，再用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。
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