綜合微生物的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)前期準(zhǔn)備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設(shè)備和材料;
(2)按比例配制培養(yǎng)材料;
(3)導(dǎo)入曝氣,進(jìn)行繁殖培養(yǎng);
(4)取液觀察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養(yǎng);
(5)分離并檢測(cè);
(6)取液儲(chǔ)存;通過(guò)該綜合微生物培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單可操作性強(qiáng),培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi),菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規(guī)格參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
紅平紅球菌說(shuō)明書(shū) | Rhodococcu | EY-J963412 |
資源名稱: 紅平紅球菌
種屬: Rhodococcus erythropolis
提供形式: 凍干粉
安全等級(jí): 1
模式菌株: no
應(yīng)用領(lǐng)域: 芳烴類固醇
培養(yǎng)基: 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 10.0 g,牛肉提取物 3.0 g,NaCl 5.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH 7.0
生長(zhǎng)條件: 30℃,好氧
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱為四級(jí)發(fā)酵。
Polyporus│leptocephalus (Jacq.) Fr. 中文名稱:黃多孔菌Polyporus│leptocephalus (Jacq.) Fr.分離基物:子實(shí)體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:150生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度:98%
Penicillium│restrictum J.C. Gilman & E.V. Abbott 中文名稱:局限青霉Penicillium│restrictum J.C. Gilman & E.V. Abbott分離基物:土壤提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長(zhǎng)條件:28存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度:98%
Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. 中文名稱:可可球二孢Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.分離基物:變色木材提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長(zhǎng)條件:25℃,好氧。生長(zhǎng)特性在PDA平板培養(yǎng)基:上(30℃、RH70%)菌落初為灰白色,后變?yōu)榛液种梁趾谏囵B(yǎng)基:為黑色,日生長(zhǎng)量為4.0cm;在全光條件下,15~20d產(chǎn)生黑色近球狀子實(shí)體,子座表面附滿菌絲。一個(gè)子座內(nèi)有多個(gè)分生孢子器,近球形,180.0~318.9×157~436.0μm;孔口周緣細(xì)胞深褐色,未成熟分生孢子單細(xì)胞、無(wú)色,為成熟孢子壁比成熟的分生孢子壁更厚,平均1.4μm;成熟的分生孢子雙細(xì)胞褐色至黑色,表面有黑白相間的縱條紋,平均22.1×12.9μm;存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度:98%
Sarocladium sp. 中文名稱:帚枝霉屬(斜面)Sarocladium sp.提供形式:凍干安全等級(jí):1模式菌株:未知培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:綜合PDA+乳糖( 1升普通PDA加5g乳糖):馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長(zhǎng)條件:22℃,好氧 純度:98%
Fusarium│sp. 中文名稱:鐮孢霉Fusarium│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:98%
Phomopsis sp. 中文名稱:擬莖點(diǎn)霉(斜面)Phomopsis sp.分離基物:根莖提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:97%
Pleurotus│djamor (Rumph. ex Fr.) Boedijn 中文名稱:淡紅側(cè)耳Pleurotus│djamor (Rumph. ex Fr.) Boedijn分離基物:子實(shí)體提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;定期移植法 純度:97%
Alrnaria│alrnata (Fr.) Keissl. 中文名稱:交鏈孢霉Alrnaria│alrnata (Fr.) Keissl.分離基物:枝干提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:97%
紅平紅球菌說(shuō)明書(shū)CD147/TCSF 細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子抗體豆腐果苷3,5-二苯硫酚Human PIIINP (N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit
CD160/By55 NK細(xì)胞受體BY55抗體拉西坦2,3-二苯硫酚Human TIMP-1 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit
CD161/NK1.1 CD161抗體夫拉扎勃(原:呋咱甲氫龍)2,3-二苯硫酚Human PINP (Procollagen I N-terminal Propeptide ) ELISA Kit
CD163/M130 CD163抗體2,3-二苯硫酚Human KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit
CD166/ALCAM/MEMD 活化白細(xì)胞粘附分子抗體3--5-(基)Human ADCY2 (Adenylate Cyclase 2) ELISA Kit
CD158a/KIR2DL1 NK細(xì)胞抑制性受體2DL1抗體13--5-(基)Human AGGF1 (Angiogenic Factor with G Patch and FHA Domains 1) ELISA Kit
CD158e NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體T反式二-(m)-雙[2-(二鄰甲苯基膦)芐基]乙二鈀(II)Human C4a (Complement Component 4a) ELISA Kit
CD158b2 NK細(xì)胞抑制性受體2DL3抗體反式二-(m)-雙[2-(二鄰甲苯基膦)芐基]乙二鈀(II)Human C5a (Complement Component 5a) ELISA Kit