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| 產(chǎn)品名稱 | 雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7 |
| 生長特性 | 懸浮生長 |
| 貨號 | EY-X63211 |
細(xì)胞名稱 雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7
形態(tài)特性 圓形
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞株由陳松森教授實驗室建立；雙位點(diǎn)Cys151和Cys183突變的c-Kit基因轉(zhuǎn)染293ET細(xì)胞，篩選獲得。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS；IL-3 or rhGM-CSF
傳代方法 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
人IPO-38蛋白(IPO38)elisa試劑盒 Human IPO-38 Elisa Kit 96T/48T
人切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)elisa試劑盒 human excision repair cross-complementation group 1, ERCC1 Elisa Kit 96T/48T
人羰基化蛋白(PC)elisa試劑盒 Human Protein Carbonyl, PC Elisa Kit 96T/48T
人磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)elisa試劑盒 human phospho-inhibitory subunit of NF-κBα, pIKBα Elisa Kit 96T/48T
人樁蛋白(Pax)elisa試劑盒 Human paxillin, Pax Elisa Kit 96T/48T
人小乳腺表皮粘蛋白(SBEM)elisa試劑盒 Human small breast epithelial mucin, SBEM Elisa Kit 96T/48T
人類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)elisa試劑盒 human Mus musculus similar to 60S ribosomal protein L12, LOC382344 Elisa Kit 96T/48T
人類粘蛋白2(ORM2)elisa試劑盒 human orosomucoid 2, ORM2 Elisa Kit 96T/48T
人MAX二聚化蛋白1(mxd1)elisa試劑盒 human MAX dimerization protein 1, mxd1 Elisa Kit 96T/48T
人水閘蛋白14(CLDN14)elisa試劑盒 human claudin 14, CLDN14 Elisa Kit 96T/48T
人可溶性半乳糖苷結(jié)合凝集素3(Lgals3)elisa試劑盒 human lectin-galactose binding-soluble 3, Lgals3 Elisa Kit 96T/48T
人主要穹窿蛋白(MVP)elisa試劑盒 human major vault protein, MVP Elisa Kit 96T/48T
人泛素蛋白D(UBD)elisa試劑盒 human ubiquitin D, UBD Elisa Kit 96T/48T
人toll樣受體2(TLR2)elisa試劑盒 human toll-like receptor 2, TLR2 Elisa Kit 96T/48T
人青少年2型血色素沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)elisa試劑盒 human hemochromatosis type 2/uvenile-uman homolog, HFE2 LISA Kit 96T/48T
人卷曲蛋白8(FZD8)elisa試劑盒 human frizzled homolog 8, FZD8 Elisa Kit 96T/48T
人蝸牛同源物2(SNAI2)elisa試劑盒 human snail homolog 2, SNAI2 Elisa Kit 96T/48T
人高爾基蛋白73(GP-73)elisa試劑盒 Human golgi protein 73, GP-73 Elisa Kit 96T/48T
人TU3A蛋白(TU3A)elisa試劑盒 Human TU3A Protein Elisa Kit 96T/48T
人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETFB)elisa試劑盒 Human electron-transfer-flavoprotein beta polypeptide, ETFB Elisa Kit 96T/48T
人皮膚蛋白(DPT)elisa試劑盒 Human dermato-pontin, DPT Elisa Kit 96T/48T
人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)elisa試劑盒 Human soluble protein 185, sp185/HER-2 Elisa Kit 96T/48T
Anti-Bassoon/RCN 鋅指蛋白231抗體 0.2ml
Anti-Bax Bax抗體 0.1ml
Anti-Bcl-2 Bcl-2抗體 0.1ml
Anti-BCRP/ABCG2/BXP-21 乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
Anti-BDNF 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子/腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子 0.1ml
Anti-Beta-casein β-酪蛋白兔抗山羊、綿羊 0.2ml
anti-bov β-lactoglobulin 牛β-乳球蛋白抗體 1.0ml
anti-bov Casein 抗牛酪蛋白抗體 1.0ml
Anti-BFGF/FGF-2 堿性成纖維細(xì)胞生長因子抗體 0.1ml
Anti-BGP 骨保護(hù)蛋白/骨鈣素抗體 0.1ml
Anti-Bid BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體 0.1ml
Anti-BIRC5/Survivin variant 細(xì)胞凋亡抑制因子5抗體 0.1ml
Anti-BK channel BK通道蛋白抗體 0.1ml
Anti-BKCa channels 鈣激活鉀通道蛋白抗體 0.1ml
Anti-BMP2 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2抗體 0.1ml
Anti-BMP-7 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7抗體 0.2ml
Anti-BNP 腦鈉素/利鈉肽抗體 0.1ml
Anti-BNP/Biotin 化腦鈉肽 0.5ml
Anti-BRAF 黑素瘤相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
Anti-BRCA1 乳腺癌易感基因1抗體 0.2ml
Anti-BRCA2 乳腺癌易感基因2抗體 0.2ml
Anti-BrdU 溴脫氧尿苷抗體 0.1ml
Anti-BRMS-1 乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 0.1ml
Anti-RCA 兔抗牛血清白蛋白抗體 0.1ml
雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株；DMF7Anti-BTG2/TIS21 B細(xì)胞遷移基因2抗體 0.1ml
Anti-BTK 鼠抗人非受體型激酶BTK單克隆抗體 0.1ml
Anti-C5a 過敏毒素C5a抗體 0.2ml
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