實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠骨髓多能干細胞;mMMSC | 貼壁生長 | EY-X63952 |
?
細胞名稱 小鼠骨髓多能干細胞;mMMSC
形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況: C3
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
原卟啉原氧化酶檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;1C81B9形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣protoporphyrinogen oxidase
查爾還原酶檢測試劑盒細胞名稱: 倉鼠腎細胞;BHK/slam/v形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣chalcone reductase
4CL-肉桂4-羥基化酶檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;TSCD3-77B2形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣4CL-Cinnamate4-hydroxylase
半胱氨脫巰基酶檢測試劑盒細胞名稱: 人肝癌細胞系;HCC7706B1HumanliverHCC7706B1形態(tài)特性: 上皮樣cysteine desulfhydrase
藻紅蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;HBcAb-12E4形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣P-phycoerythrin
藻藍蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;RVAb-2形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣phycocyanin
蘋果檢測試劑盒細胞名稱: 樹鼩肝細胞永生化細胞系;ITH6.1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣malic acid
脫落合成酶檢測試劑盒細胞名稱: 人唾液腺腺樣囊性癌癌相關成纖維細胞系;CAF-SA形態(tài)特性: 上皮樣hormone abscisic acid
生長素合成酶檢測試劑盒細胞名稱: 非洲綠猴腎細胞;Vero/Slam/V形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣auxin
極長鏈脂肪檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;RVAb-1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Very Long Chain Fatty Acid
L-蘋果脫氫酶檢測試劑盒細胞名稱: 豬支氣管上皮細胞系;hTERT-PBEC形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣L-Malate dehydrogenase
D-蘋果脫氫酶檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;1F2D2形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣D-Malate dehydrogenase
甜菜素檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;5A9B8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣betalains
醇溶谷蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;8H3C4形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣alcohol soluble protein,prolamin(e)
醇溶蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;4A-1G7形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣alcohol soluble protein
紅色熒光蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;F112形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣RFP
尿酶檢測試劑盒細胞名稱: 雜交瘤細胞株;2E9S.suis-AK形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Homogentisase
小鼠骨髓多能干細胞;mMMSC異鼠李素-3-O-新55033-90-4中文別名:異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷
英文名:Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside
CAS登錄號:55033-90-4
分子式:C28H32O16
分子量:624.55
分子結(jié)構(gòu):
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等
提取來源:香蒲科植物水燭香蒲的花蒲黃
藥理藥效:治血化瘀的作用
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年