實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
胚胎干細(xì)胞；HES3.1 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63703 |
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細(xì)胞名稱 胚胎干細(xì)胞；HES3.1
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Koumine
CAS No.：1358-76-5
中文名：鉤吻素子
分子式：C20H22N2O
蘆薈苷 訂購|咨詢 高鐵血紅蛋白還原酶(MHBR) 規(guī)格： 20mg
D()奎寧 訂購|咨詢 高鐵血紅蛋白還原酶(MHBR) 規(guī)格： 20mg
甘松對(duì)照藥材 訂購|咨詢 高鐵血紅蛋白還原酶(MHBR) 規(guī)格： 1g
薏苡仁對(duì)照藥材 訂購|咨詢 高密度脂蛋白(HDL) 規(guī)格： 1g
野漆樹苷 訂購|咨詢 高密度脂蛋白(HDL) 規(guī)格： 20mg
白當(dāng)歸素 訂購|咨詢 高密度脂蛋白(HDL) 規(guī)格： 10mg
吳茱萸 訂購|咨詢 痙攣性截癱蛋白11(SPG11) 規(guī)格： 10mg
黃連 訂購|咨詢 痙攣蛋白(SPAST) 規(guī)格： 20mg
擬人參皂苷RT5P 訂購|咨詢 脊柱后側(cè)凸肽酶(KY) 規(guī)格： 20mg
白頭翁皂苷A3 訂購|咨詢 脊椎蛋白1(SPON1) 規(guī)格： 20mg
紫花前胡苷 訂購|咨詢 脊椎蛋白1(SPON1) 規(guī)格： 20mg
吳茱萸次 訂購|咨詢 脊椎蛋白2(SPON2) 規(guī)格： 20mg
三尖杉寧 訂購|咨詢 脊髓灰質(zhì)炎病受體(PVR) 規(guī)格： 30mg
淡豆豉 訂購|咨詢 脊髓灰質(zhì)炎病受體相關(guān)分子1(PVRL1) 規(guī)格： 15g
細(xì)菌內(nèi)素 訂購|咨詢 脊髓灰質(zhì)炎病受體相關(guān)分子4(PVRL4) 規(guī)格： 10000EU/支
槐花 訂購|咨詢 凋亡抑制因子5(API5) 規(guī)格： 1g
三胞苷二 訂購|咨詢 凋亡相關(guān)因子(FAS) 規(guī)格： 30mg/瓶
角鯊 訂購|咨詢 凋亡相關(guān)因子(FAS) 規(guī)格： 0.5ml/支
γCatenin γ連環(huán)素/連接蛋白γ抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml TetrahydroLBiopterin free base
Thrap3/TRAP150 甲狀腺激素受體相關(guān)蛋白3抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Tirofiban HCl
PRMT5 組蛋白精甲基轉(zhuǎn)移酶5抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Tirofiban HCl
ELL2 聚合酶延伸因子2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Pullulan
Escherichka coli K88K99/ETECK88 豬源產(chǎn)腸素性大腸桿菌K88K99抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Vitamin E,dlαtocopherol
CSTF2T/CstF64 細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Stavudine
OGlAc transferase O位N葡萄糖OGT抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Stavudine
SAP62 剪接體相關(guān)蛋白62抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Moclobemide
脫氫抗壞血 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Dehydroascorbicacid 含量:CP，98.5%
脫碳秋水仙 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Demecolcine 含量:超純，98%
脫瓜萎鐮菌 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Deoxynivalenol 含量:BR，90%
脫核糖核苷′三 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:dNTPs 含量:高純，97%
脫核糖核緩沖液 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:DNABuffer 含量:高純，98%
脫腺苷單二 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:dAMP，2Na 含量:高純，98%
脫腺苷單 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:dAMP 含量:超純，98%
脫腺苷三三 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:dATP，3Na 含量:BR，98%
脫葉靈 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:TDZ 含量:高純，99%
妥布 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Tobramycin 含量:BR，3000u/mg
人胚胎干細(xì)胞；HES3.1麥康凱瓊脂添加劑規(guī)格：1ml/支*5用途：每200ml HB0121培養(yǎng)基中添加1支(含0.01mg和亞碲鉀0.5mg) 配10盒
RS培養(yǎng)基規(guī)格：100g用途：用于致病性嗜水氣單胞菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
BCYE-Cys瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格：可溶性焦磷鐵用途：0.025g每支含量
含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE）顆粒規(guī)格：250g用途：用于單增李氏菌的分純，培養(yǎng)，可用于做7%羊血瓊脂
蔗糖胰蛋白胨肉湯規(guī)格：250g用途：用于致病性嗜水氣單胞菌酶聯(lián)免疫試驗(yàn)
刃天青規(guī)格：1g用途：微生物指示劑
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