公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肝腹水腺癌細(xì)胞;SK-HEP-1 | 貼壁生長 | EY-X63466 |
細(xì)胞名稱 肝腹水腺癌細(xì)胞;SK-HEP-1
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: SK-HEP-1細(xì)胞系已被鑒定為內(nèi)皮來源。該細(xì)胞系為異倍體女性人(XX),染色體在亞三倍體范圍內(nèi)。在裸鼠中,它能形成與肝癌相一致的大細(xì)胞癌。
培養(yǎng)條件:
傳代方法:
傳代情況: 不詳
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
rmTGF-b RI/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 食管癌細(xì)胞;TE-11 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
rmTFPI, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 肺扁平上皮癌細(xì)胞;QG-56[QG56] RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
rmTestican 3, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞;HCCLM3
rmTCCR/WSX-1/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱:癌細(xì)胞;BT-549 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%;0.023IU/ml胰島素
rmTCAM-1, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;A172 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmTACI/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;A3 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmTACE/ADAM17, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 胰腺癌細(xì)胞;PANC-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmSyndecan-4, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT116[HCT116] McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmSyndecan-1, CF (50 UG)細(xì)胞名稱:神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmSulfamidase/SGSH, CF (20 UG)細(xì)胞名稱:癌細(xì)胞;MDA-MB-231 L15:LeibovitzMedium優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmsTNF RII, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 前列腺癌細(xì)胞;22Rv1 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmsTNF RII (50 UG)細(xì)胞名稱: 急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞;KG-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmsTNF RI, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620[SW620;SW-620] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmsTNF RI (50 UG)細(xì)胞名稱: 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO205 RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmST2/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
rmSR-AI/MSR1, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 肝癌細(xì)胞;Hep3B2.1-7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
肝腹水腺癌細(xì)胞;SK-HEP-1人通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(GTC)ELISA試劑盒MCP-3ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人白介素1β轉(zhuǎn)換酶(ICE)ELISA試劑盒MCP-3ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人磷酯酶C(PLC)ELISA試劑盒MCP-3ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C(PIPLC)ELISA試劑盒MCP-4ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA試劑盒MCP-4ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒MCP-4ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人神經(jīng)氨酶(NA)ELISA試劑盒MCPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人磷酯酶Cγ鏈(PLCγ1)ELISA試劑盒M-CSFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。